Vibrio cholerae según su lipopolisacárido capsular  se clasifica en más de 200 serogrupos, divididos en O1/139 y no-O1/139. Los serogrupos  no-O1 producen cuadros que van desde una diarrea leve hasta la deshidratación grave. Con el objetivo de caracterizar el fenotipo de aislamientos de V. cholerae no-O1/139 provenientes de pacientes con enfermedad diarreica aguda en Cuba, así como conocer la susceptibilidad antimicrobiana frente a los fármacos de interés empleados en el tratamiento y determinar la presencia de factores de virulencia enzimáticos, se realizó un estudio descriptivo de corte transversal entre febrero y junio de 2014. Se estudiaron 112 aislamientos pertenecientes al cepario del Laboratorio Nacional de Referencia de Enterobacterias Patógenas. Se aplicaron  métodos convencionales basados en pruebas bioquímicas y serológicas.  El 100% de los aislamientos se confirmaron como V. cholerae no-O1/139. Los mayores porcentajes de sensibilidad se obtuvieron frente a doxiciclina (97.32 %), ciprofloxacino (96.42 %) y cloranfenicol (91.96 %), y los mayores de resistencia frente a ampicilina (66.07 %), sulfonamida (42.85 %) y trimetropim-sulfametoxazol (38.39 %). Se encontraron seis perfiles de resistencia, de ellos cuatro por primera vez en Cuba, y seis patrones de multirresistencia igualmente no conocidos. Todos los aislamientos poseían al menos un factor de virulencia, las enzimas extracelulares encontradas con mayor frecuencia fueron gelatinasa (84.82 %) y lecitinasa (69.64 %). Por los elevados porcentajes de resistencia frente a los antimicrobianos mencionados, se sugiere no usar estos antibióticos en el tratamiento de estas infecciones. Se demostró la presencia de enzimas extracelulares como factores de virulencia en los aislamientos estudiados.